細胞名稱LM/TK(LMTK-)（小鼠胸腺激酶缺陷細胞）

　　種屬小鼠

　　年齡（性別）100日齡

　　組織來源

　　生長特性貼壁

　　細胞形態成纖維細胞樣

　　背景描述

　　生長培養基DMEM高糖＋10%FBS＋1%P/S

　　培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

　　培養操作

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4.將細胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為類；

　　1.細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

　　2.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

　　3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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